图位克隆（关于图位克隆）

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1、 图位克隆，亦称定位克隆。是指基于目标基因紧密连锁的分子标记在染色体上的位置来逐步确定和分离目标基因的技术方法。用该方法分离基因是根据目的基因在染色体上的位置进行的，无需预先知道基因的DNA顺序，也无需预先知道其表达产物的有关信息，但应有以下两方面的基本情况：一是有一个根据目的基因的有无建立起来的遗传分离群体，如F2、DH、BC、RI等。二是开展以下几项工作：①首先找到与目标基因紧密连锁的分子标记。②用遗传作图和物理作图将目标基因定位在染色体的特定位置。③构建含有大插入片段的基因组文库(BAC库或YAC库）。④以与目标基因连锁的分子标记为探针筛选基因组文库。⑤用阳性克隆构建目的基因区域的跨叠群。⑥通过染色体步行、登陆或跳跃获得含有目标基因的大片段克隆。⑦通过亚克隆获得含有目的基因的小片段克隆。⑧通过遗传转化和功能互补验证最终确定目标基因的碱基序列。 

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